Digital-PCR : un nouvel outil pour l’analyse des biomarqueurs de résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase de l’EGFR - 20/12/14

La résistance aux inhibiteurs de tyrosine kinase de l’EGFR (ITK-EGFR) est un axe clé de la prise en charge des cancers bronchiques non à petites cellules (CBNPC). Notre équipe a étudié les facteurs de résistance aux ITK-EGFR par des techniques conventionnelles et montré la nécessité d’optimiser les techniques d’analyse qui doivent être plus sensibles et nécessiter le moins de matériel tumoral possible. La digital-PCR (dPCR) répond à ces critères. Nous présentons une étude de faisabilité de l’analyse en dPCR des facteurs moléculaires de résistance aux ITK-EGFR.

Les patients atteints de CBNPC métastatique avec mutation de l’EGFR résistants aux ITK-EGFR ont été sélectionnés. Nous avons analysé la mutation T790M de l’EGFR, l’amplification de MET et les mutations de PI3KCA par dPCR. Ces analyses ont été mises au point sur lignées cellulaires puis réalisées sur l’ADN tumoral des patients.

Sur lignées cellulaires, aucune mutation n’a été mise en évidence pour le témoin négatif et des mutations ont bien été trouvées dans les lignées mutées. Onze patients ont été sélectionnés. Des mutations non trouvées en routine ont été mises en évidence. Des mutations ont été trouvées même dans de petits échantillons. De plus, la dPCR permet une quantification de l’ADN et la recherche d’amplifications.

La dPCR est très sensible, reproductible et permet une quantification. Elle permet de réduire la taille des échantillons, les coûts et d’optimiser l’individualisation thérapeutique. Cependant, nous ne connaissons pas le seuil de significativité des anomalies géniques détectées et des études ultérieures sont nécessaires.